Práctica 2: Determinación de la glucemia por el método de la oxidasa-peroxidasa.

OBJETIVO

Determinación cuantitativa de glucosa.

REACTIVOS

 

R1 Tampón	TRIS ph 7,4                        92 mmol/L Fenol                                  0,3 mmol/L
R2 Enzima	Glucosa oxidasa              15000 U/L Peroxidasa                       1000 U/L 4-Aminoenazona               2,6mmol/L
Glucose ca	Patrón primario acuoso de Glucosa  100mg/dl

 

MATERIAL

 

• Espectrofotómetro
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio

 

MUESTRAS

Suero o plasma, libre de hemólisis y LCR

 

El suero debe separarse lo antes posible del coágulo.

La glucosa en suero o plasma es estable 3 días a 2-8ºC

 

PROCEDIMIENTO:

Condiciones del ensayo:
 

 

Longitud de onda--- 505 nm

Cubeta--------------1 cm paso de luz
Temperatura---------37ºC/15-25ºC

2. Ajustamos el espectrofotómetro a cero para el blanco muestra con agua destila

3. Pipetear en una cubeta:



4. Mezclar e incubar 1o minutos a 37ºC o  30 minutos a temperatura ambiente(15-25ºC

5.Leer la absorbancia(A) del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo.


El color es estable como mínimo 30 minutos.

CÁLCULOS

Muestra: 0,894
Patrón: 0,431

 

((A)Muestra(A)/Patrón)x100 (conc. Patrón)=mg/dl de glucosa en la muestra 

(0,894/0,431)X100= 207,42 mg/dl