Práctica 7: Determinacion de proteínas totales por el método de biuret.

OBJETIVO

Determinar de forma cuantitativa proteínas totales mediante el método de Biuret.
 

FUNDAMENTO

 
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada.

MATERIALES

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 540 nm
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
• Micropipetas y pipetas manuales
• Muestra: suero o plasma heparinizado

REACTIVOS

•R Biuret (potasio sodio tartrato, yoduro sódico, yoduro de potasio, sulfato de cobre (II), hidróxido de sodio)

•T PROTEIN CAL ( patrón primario de albúmina bovina)

PROCEDIMIENTO

1.Condiciones del ensayo:

•  Longitud de onda: 540 nm
•  Cubeta: 1 cm paso de luz
•  Temperatura 37ºC/ 15-25ºC

2.Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3.Pipetear en una cubeta:
 

4.Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente. 5.Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.

RESULTADO

 

((A) muestra - (A) Blanco/(A) Patrón - (A) Blanco ) X7 (Conc. Patrón) =g/dL de proteínas

Patrón: 0’483

Muestra: 0’481

(0’481/ 0’483)x 7= 6’97 g/dL de proteínas