Práctica 1: Construcción de una curva de calibración y manejo del espectofotómetro.

MATERIAL

• Erlenmeyer con cromógeno 1, de concentración 800 mg/dL.
• Erlenmeyer con cromógeno 2, de concentración 600 mg/dL.
• Agua destilada.
• Pipetas manuales y automáticas.
• Tubos de ensayo.
• Cubetas de espectrofotometría.
• Espectrofotómetro de absorción.

PROCEDIMIENTO

Se pretenderán utilizar dos colorantes como analitos con capacidad cromógena para elaborar sendas baterías de dilución seriadas. Con ellas realizaremos medidas espectrofotométricas, elaboraremos las correspondientes curvas de calibración y calcularemos la concentración de diversas disoluciones problemas. Pasaremos por las siguientes fases:

Batería azul:         

1. En una gradilla colocamos 5 tubos de ensayo numerados del 1 al 4.
2. En cada tubo vertemos 4 ml de agua destilada.
3. Cogemos de la solución madre el volumen de paso(4 ml) y lo vertemos al tubo numerado con el número 1.
4. Mezclamos y desde el tubo 1 cogemos 4ml y lo pasamos al tubo 2, así sucesivamente hasta el tubo número 5.
5. Desechamos 4 ml del tubo 5 a otro tubo.
6. En la cubetas de espectofotometría vertemos la dilución de cada tubo.
7. Elegimos la longitud de onda correspondiente a cada cromógeno.
8. Medimos la absorbancia de cada uno de los tubos, y con los datos obtenidos elaboramos la curva de calibración                                      
Vp =  4ml/2-1= 4 ml.
 
Absorbancia:
1: 1´149
2: 0´577
3.0´304
4: 0´154
5: 0´080
 
 
 
 

                                          Batería roja:

1. 1 .En una gradilla colocamos 4 tubos de ensayo numerados del 1 al 4.
2. En cada tubo vertemos 3 ml de agua destilada.
3. Cogemos de la solución madre el volumen de paso(1,5 ml) y lo vertemos al tubo numerado con el número 1.
4. Mezclamos y desde el tubo 1 cogemos 1,5 ml y lo pasamos al tubo 2, así sucesivamente hasta el tubo número 5.
5. Desechamos 1,5ml del tubo 4 a otro tubo.
6. En la cubetas de espectofotometría vertemos la dilución de cada tubo
7. Elegimos la longitud de onda correspondiente a cada cromógeno
8. Medimos la absorbancia de cada uno de los tubos, y con los datos obtenidos elaboramos la curva de calibración     

                        Vp: 3ml/ 3-1 = 1,5 ml
 
Absorbancia:
1: 1´612
2: 0´615
3: 0´202
4: 0´071