Práctica 3: Determinación de la glucemia por el método de la hexokinasa.

OBJETIVO

Determinación cuantitativa de glucosa

REACTIVOS

R 1  Tampón

• TRIS pH  7,5 -4 mmol/L
• ATP          - 2,1 mmol/L
• Mg 2+        -0,8 mmol/L)

 R2 Enzimas

• NAD+               -2 mmol/L
• Hexoquinasa (HK)   -1000 U/L
• Glucosa-6-fosfato  -100 U/L

GLUCOSA CAL

• Calibrador primario de glucosa 100 mg/dL

MATERIAL ADICIONAL

 

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm
• Cubetas de 1.0 cm de paso de luz
• Equipamiento habitual de laboratorio

MUESTRAS

• Suero o plasma libre de homolisis
• Orina

Estabilidad: la glucosa en suero o plasma es estable 3 dias a 2-8ºC

PROCEDIMIENTO

1.Condiciones del ensayo:

• Longitud de onda -340 nm
• Cubeta           -1cm paso de luz
• Temperatura      -37ºC/15-25ºC

2.Ajustar el espectrofotometro a cero frente a agua destilada.

3.Pipetear en una cubeta:

 

4.Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 min. a temperatura ambiente (15-25ºC)

 

5.Leer la absorbancia ( A) del calibrador y la muestra, frente al blanco de reactivo

 CÁLCULOS

((A)Muestra-(A)Blanco/(A)Patrón-(A)Blanco) x 100 = mg/dl de glucosa en la muestra

RESULTADOS

 

• Muestra: 0,816
• Patrón: 0,344

 

(0,816/0,344) X100= 237,21 mg/dl